符合GMP規範的胜肽分析（微量樣品）
訂購1mg胜肽時，業界標準是收到1 mg凍乾粉末，其中僅含有60-80%的胜肽。為了將正確劑量的胜肽加入治療藥物中，首先需要確定所提供末端中胜肽的絕對含量。 測定淨胜肽含量面臨諸多挑戰：首先，由於胜肽通常以極小的批次生產，因此分析應盡可能使用少量樣品。其次，粉末中胜肽的絕對含量需要以最高的準確度和精密度進行測量，因為這直接影響作為活性藥物成分的胜肽的正確劑量。這意味著分析的各個方面都應符合GMP指南和藥典的測量方法。最後，由於需要對每個胜肽批次進行絕對胜肽含量測定，因此分析應盡可能減少人工操作，並降低每次分析的成本。

UNICUBE trace 進行氮元素分析
胜肽物質是凍乾粉末中唯一的氮源。因此，一旦已知粉末中氮的絕對含量，即可計算出勝肽的絕對含量：

「胜肽中氮的百分比」是一個已知量，由勝肽的化學式推導得出。

使用元素分析儀 UNICUBE trace 可輕鬆完成胜肽粉末的氮元素分析。此測量完全符合 USP <1057> 方法 7 程序 2 和歐洲藥典專論 01/2008:02533 方法 7B（總蛋白質分析程序）。除手動樣品製備外，分析完全自動化，僅需 5 分鐘。為了獲得高品質的淨胜肽含量數據，只需不到 1 mg的胜肽粉末。就最大樣品量而言，此分析儀每個樣品最多可處理 10 mg氮。單次分析的成本亦相當低。此分析儀的設計目的在減少維護次數，且無需任何工具。此外，分析儀出廠時已建立檢量線，檢量線效期長達數年。我們提供由經過訓練的服務工程師執行的安裝確認 (IQ)、運作確認 (OQ) 和效能確認 (PQ) 服務，並配備符合美國聯邦法規 21 CFR Part 11 規定的軟體。

UNICUBE trace工作原理
樣本稱重後用錫箔紙包裹，然後放入分析儀的自動進樣器中。啟動分析後，每樣品只需 5 分鐘即可自動分析氮絕對量。分析儀內部的分析步驟如下：首先，載氣會吹走所有可能隨樣品進入分析儀的環境空氣。然後，樣品落入高溫爐中燃燒，並完全轉化為氣體。此時，樣品中的氮以 N₂ 氣體的形式存在。其他氣體與 N₂ 分離後，由熱導偵測器進行檢測。此檢測器的氮訊號在分析儀軟體中顯示為一個峰值。分析儀隨後將峰面積轉換為氮的絕對含量。

胜肽實驗及檢測極限/定量極限
為了驗證 UNICUBE trace 的準確度和精密度，我們分析了 Bachem 產品中的兩種胜肽。這些胜肽隨附分析數據表，其中列出了胜肽粉末中的氮含量。這使得我們可以將 UNICUBE trace 的分析結果與認證值進行比較。

第一種胜肽（C₂₃H₃₄N₆O₆，三氟乙酸鹽，產品編號 4025806）可用於癌症和發炎研究。稱取 0.4 mg 此胜肽粉末，用錫箔紙包裹，並轉移至 UNICUBE trace 的自動進樣器。軟體啟動分析程序後，分析過程將全自動進行。將胜肽粉末中的氮含量進行五次重複測量，得到平均值為 13.57%，絕對標準差為 0.08%（表 1）。透過 UNICUBE® 曲線測定的值與 Bachem 所聲明的 13.60% 的值非常吻合。

在第二個實驗中，我們分析了具有生長調節作用的血漿GHK三胜肽tripeptide（C₁₄H₂₄N₆O₄，乙酸鹽，產品編號4000308），該三胜肽在再生醫學領域（例如傷口癒合）有應用。本實驗旨在驗證測量精度與樣品絕對氮含量之間的關係。為此，我們將胜肽粉末溶解於水中，並用移液器分取等分試樣至錫箔容器中。將敞開的錫箔容器置於70℃的乾燥箱中過夜。第二天，將容器折疊封口並放入UNICUBE trace的自動進樣器中。分別含有 10 µg N、20 µg N 和 60 µg N 的胜肽粉樣本測定了其氮含量百分比。每個濃度水平均進行了五次重複測量。表 2 的結果表明，即使對於氮含量絕對值較低的樣品，UNICUBE trace 也能非常準確、精確地測定氮含量：對於分別含有 60 µg N 和 20 µg N 的樣品，測得的氮含量分別為 19.82 ± 0.03% 和 19.83 ± 0.05%，而認證值為 19.196%。這轉化為相對標準偏差分別為 0.17%（60 µg N 樣品）和 0.26%（20 µg N 樣品）。

表 1. 0.4 mg 胜肽粉重複分析結果（認證值：胜肽粉中 N 含量為 13.60%）
 

此外，也確定了UNICUBE的檢測極限（LOD）和定量極限（LOQ）。為了計算這些值，需要進行重複測量，以獲得能夠與分析儀背景訊號明顯區分的最小氮峰。載氣和錫箔容器本身的氮含量極低，因此無法觀察到氮分析峰。因此，確定了用錫箔包裹的土壤樣本的最小重量，該重量能夠產生可辨別的氮分析峰。隨後，對確定重量的土壤樣本進行了10次重複分析。借助其檢量線，將峰面積轉換為氮的絕對含量。此檢量線使用了一種溶液，該溶液是將具有認證氮濃度的天冬胺酸標準品溶解於水中製備的。

表 2. 相對於樣品中氮絕對量的準確度和精密度（認證值：胜肽粉中氮含量為 19.76%）

以10個土壤樣本重複分析的絕對氮濃度值取平均值，計算絕對標準差。基於這些數值，計算出UNICUBE®微量的LOD和LOQ：
LOD = 空白值 + 3 × 標準差
LOQ = 空白值 + 10 × 標準差

如表 3 所示，氮的 LOD 為 0.62 µg，而氮的 LOQ 為 1.00 µg。

表 3. 以 22 mg 缺氮土壤樣本 10 次重複測量的 LOD 和 LOQ 測定結果

結論
使用 UNICUBE 可以輕鬆測定冷凍乾燥胜肽粉的絕對胜肽含量。此測量完全符合 USP <1057> 方法 7 程序 2 和歐洲藥典專論 01/2008:02533 方法 7B 中關於總蛋白質測定程序的要求。除了稱胜肽粉並用錫箔紙包裹外，整個分析過程完全自動化，只需 5 分鐘。透過分析 Bachem 產品目錄中的兩種胜肽，驗證了此分析儀的高精度和高準確度，從而可以比較胜肽粉中測得的氮含量和認證的氮含量。每次分析僅需不到 1 mg的胜肽粉。為了完全符合 GMP 標準，UNICUBE具經過培訓的服務工程師執行的 IQ/OQ/PQ 驗證程序以及符合 21 CFR Part 11 要求的軟體。

資料來源:elementar官網
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